人纖溶酶原激活劑ELISA試劑盒是一種基于酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)原理的高靈敏度生物檢測產(chǎn)品,主要用于定量檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液等樣本中人纖溶酶原激活劑的濃度。纖溶酶原激活劑主要包括組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)和尿激酶型纖溶酶原激活劑(u-PA),它們在調(diào)節(jié)體內(nèi)纖維蛋白溶解系統(tǒng)、維持血管通暢以及參與腫瘤轉(zhuǎn)移、血栓形成等生理病理過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。
該試劑盒通常采用雙抗體夾心法進行檢測。其核心組件包括預包被抗人纖溶酶原激活劑特異性抗體的微孔板、生物素標記的檢測抗體、辣根過氧化物酶(HRP)標記的親和素、顯色底物(如TMB)及標準品等。操作步驟簡便:將待測樣本加入孔中,與包被抗體結(jié)合后洗滌,再加入生物素化抗體復合物,隨后加入HRP標記的親和素,最后加入顯色底物,通過酶標儀在450nm波長下讀取吸光度值(OD值)。根據(jù)標準曲線計算出樣本中目標蛋白的濃度。
一、整套試劑盒未開封(原裝)通用標準
常規(guī)短期儲存(1–6個月,常規(guī)使用)
整套試劑盒統(tǒng)一2~8℃冰箱避光冷藏,嚴禁冷凍、室溫長期放置
有效期:外包裝標注6個月,全程2–8℃可完整保存至保質(zhì)期結(jié)束。
存放位置:冰箱中層,遠離冰箱出風口、門架,防止局部低溫結(jié)冰損傷試劑;避光存放,TMB顯色液對光照極敏感。
長期暫存(超過1個月不用,長期閑置)
取出標準品、濃縮生物素抗體、HRP酶結(jié)合物三類蛋白敏感組分,分裝后-20℃避光凍存;剩余液體(洗滌液、稀釋液、終止液、包被板)維持2–8℃冷藏,整套避光密封。
-20℃凍存條件下,蛋白組分可穩(wěn)定保存12個月,全程避免反復凍融。
運輸臨時存放
到貨后立刻轉(zhuǎn)入2–8℃冷藏,不可室溫放置超2小時;夏季快遞到貨優(yōu)先冰浴降溫再入冰箱。
t-PA ELISA試劑盒外包裝儲存標注
二、分組分單獨保存(開封后重點)
1.可拆卸預包被酶標板(核心,嚴禁冷凍)
已拆未用完板條:立刻放回原鋁箔袋,放入配套干燥劑,封口夾密封,2~8℃避光,最多存放30天
禁止:-20℃冷凍,冰晶會破壞固相包被抗體,造成信號大幅下降、曲線失效。
防潮要點:鋁袋破損更換全新自封袋+新干燥劑,防止板條吸潮長菌。
2.標準品(液態(tài)蛋白,最易失活)
未復溶凍干標準品:2–8℃冷藏;長期不用分裝-20℃避光。
復溶后標準品:單次使用剩余液體分10–20μL無菌EP管分裝,-20℃避光凍存;2–8℃僅可短期存放1周,不可長期冷藏。
紅線:杜絕反復凍融,凍融≥3次蛋白降解,靈敏度顯著降低。
3.生物素化抗體、HRP酶結(jié)合物(濃縮液)
未稀釋原液:2–8℃避光;長期閑置分裝-20℃避光。
稀釋后的工作液:現(xiàn)配現(xiàn)用,不可留存過夜,配完當日用完。
避光要求:棕色瓶存放,外層包裹鋁箔遮光,HRP遇光快速失活。
4.TMB顯色液(光敏感)
全程2–8℃避光,鋁箔包裹棕色瓶;一旦變藍、渾濁直接報廢,嚴禁冷凍、暴曬、室溫久放。
5.終止液、濃縮洗滌液、各類稀釋液(穩(wěn)定性高)
常規(guī):2–8℃冷藏,開封擰緊瓶蓋防揮發(fā),可存放至試劑盒有效期。
濃縮洗滌液低溫出現(xiàn)白色結(jié)晶:30–37℃水浴溶解,冷卻后正常使用,不影響檢測結(jié)果。
終止液含弱酸,密封防止腐蝕瓶蓋、揮發(fā)。
6.封板膜、說明書、干燥劑
室溫干燥避光存放即可,無需冷藏。
三、開封后分場景保存細則
1周內(nèi)全部用完
所有試劑統(tǒng)一2–8℃避光,每次取用快速操作,減少室溫暴露時間,用完立刻放回冰箱。
1個月內(nèi)分次使用
酶標板:密封+干燥劑2–8℃;
標準品、酶結(jié)合物、濃縮抗體:分裝-20℃凍存,每次取1管解凍即用,其余繼續(xù)冷凍;
顯色液、終止液、洗滌液:持續(xù)2–8℃避光。
超過3個月不使用
全部蛋白敏感組分分裝-20℃避光;包被板密封冷藏;整套外包裝裹鋁箔避光。
四、關(guān)鍵禁止操作(失效高發(fā)誘因)
嚴禁將整套試劑盒放入-20℃冷凍,尤其酶標板冷凍直接報廢;
標準品、酶結(jié)合物禁止反復凍融,分裝是唯1解決方案;
TMB顯色液不可光照、高溫,出現(xiàn)淡藍色即失效;
所有瓶蓋必須擰緊,防止水分揮發(fā)、交叉污染;
不可放置冰箱門、制冷風口,局部結(jié)冰會損傷蛋白;
試劑盒不可高溫環(huán)境(>30℃)放置超過30分鐘。
五、短期取用平衡操作
每次實驗前,將需要的試劑從冰箱取出,室溫平衡20–30分鐘再操作;實驗結(jié)束全部試劑及時歸位冷藏/冷凍,不要隔夜放置室溫。
六、配套待測樣本同步儲存參考(補充)
血清/血漿t-PA樣本短期2–8℃可存24h;長期分裝-20℃凍存,避免反復凍融,不超過3個月。
