核酸定量檢測(cè)試劑盒是分子診斷領(lǐng)域的核心工具,廣泛應(yīng)用于臨床疾病篩查、藥物研發(fā)、基因工程及食品安全檢測(cè)等場(chǎng)景。其根本目的是對(duì)樣本中DNA或RNA的濃度、純度及完整性進(jìn)行精準(zhǔn)測(cè)定,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)(如PCR、測(cè)序、文庫(kù)構(gòu)建)提供可靠的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。
主流試劑盒通?;跓晒馊玖戏ɑ騍YBR Green/EB類似物技術(shù)。這類試劑利用能與雙鏈核酸特異性結(jié)合的熒光染料,在激發(fā)光下發(fā)出與核酸含量成正比的熒光信號(hào)。通過(guò)高靈敏度的熒光檢測(cè)儀讀取信號(hào)值,并結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出未知樣本的絕對(duì)濃度。部分高d試劑盒采用單鏈特異性染料,可直接用于RNA定量而無(wú)需反轉(zhuǎn)錄,極大簡(jiǎn)化了操作流程。此外,針對(duì)微量或痕量樣本,還有基于PicoGreen或RiboGreen的高靈敏度版本,檢測(cè)下限可達(dá)pg/mL級(jí)別。
一、測(cè)前準(zhǔn)備
清潔雙手:使用流動(dòng)清水或消毒液清洗雙手,避免污染樣本。
檢查試劑盒:仔細(xì)閱讀抗原檢測(cè)試劑配套說(shuō)明書(shū)及抗原檢測(cè)相關(guān)注意事項(xiàng),檢查抗原檢測(cè)試劑是否在保質(zhì)期內(nèi),檢查鼻拭子等內(nèi)容物是否有缺失或破損。如發(fā)現(xiàn)試劑過(guò)期或試劑內(nèi)容物缺失,應(yīng)及時(shí)更換。
準(zhǔn)備環(huán)境:確保操作環(huán)境干凈、整潔、通風(fēng)良好,保持室內(nèi)溫度在14至30攝氏度之間(產(chǎn)品保存溫度要在2至30攝氏度之間)。
二、樣本采集
擤去鼻涕:使用衛(wèi)生紙擤去鼻涕,確保鼻腔清潔。
取出鼻拭子:拆開(kāi)鼻拭子外包裝,避免手部接觸拭子頭。
鼻腔采樣:
頭部微仰,一手執(zhí)拭子尾部,貼一側(cè)鼻孔進(jìn)入。
沿下鼻道的底部向后緩緩深入1至1.5厘米。
在鼻腔內(nèi)旋轉(zhuǎn)至少4圈,停留時(shí)間不少于15秒。
使用同一拭子對(duì)另一鼻腔重復(fù)相同操作。
年齡14歲以上的,可自行進(jìn)行鼻腔拭子采樣;年齡2到14歲的,應(yīng)由成人代為采樣。
三、樣本處理
插入提取管:將采集樣本后的鼻拭子立即置于采樣管中,拭子頭在樣本提取液中旋轉(zhuǎn)至少30秒。
擠壓拭子頭:隔著采樣管外壁擠壓拭子頭至少5次,確保拭子頭液體擠干。
棄去拭子:將拭子棄去,采樣管蓋蓋。
四、加樣檢測(cè)
取出檢測(cè)卡:撕開(kāi)測(cè)試卡,將其取出,平放桌面上。
滴加樣本:擠壓提取管,將液體垂直滴入檢測(cè)卡樣本孔中,通常滴加4滴。
等待結(jié)果:靜置15分鐘,等待紅色條帶出現(xiàn)。注意,20分鐘后判讀結(jié)果無(wú)效。
五、結(jié)果判讀
陰性結(jié)果:如果檢測(cè)卡上只有C線顯色,表示陰性,即樣本中未檢測(cè)出新冠病毒抗原。
陽(yáng)性結(jié)果:如果檢測(cè)卡上C線和T線都顯色,表示陽(yáng)性,即樣本中檢測(cè)出新冠病毒抗原。此時(shí)應(yīng)盡快聯(lián)系社區(qū)或醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行進(jìn)一步確認(rèn)。
無(wú)效結(jié)果:如果檢測(cè)卡上C線不顯色,無(wú)論T線是否顯色,均表示無(wú)效。這可能是由于操作不當(dāng)或試劑盒失效等原因?qū)е拢枰匦聶z測(cè)。
六、測(cè)后處理
妥善處理廢棄物:將使用過(guò)的物品(如鼻拭子、采樣管、檢測(cè)卡等)按廢棄物進(jìn)行合理處理,避免造成環(huán)境污染和傳播。
繼續(xù)做好個(gè)人防護(hù):無(wú)論檢測(cè)結(jié)果如何,都應(yīng)繼續(xù)做好個(gè)人防護(hù)措施,如佩戴口罩、勤洗手、保持社交距離等。
